實(shí)驗(yàn)步驟


懸浮液或生物膜中的共培養(yǎng)


白色念珠菌和/或細(xì)菌在懸浮液或粘附的生物膜中生長 在六孔聚苯乙烯板中,在腦心輸液 (BHI) 培養(yǎng)基中,補(bǔ)充有 5% 胎牛血清 (BHI-FBS)。 補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)程序中提供了其他詳細(xì)信息。


集落形成單位分析


菌落形成單位從生物膜或生物膜的系列稀釋液中鋪板 懸浮培養(yǎng)。 稀釋液涂在 YPD 瓊脂、LB 瓊脂或血液上 瓊脂 30 或 37 離心,視物種而定。 補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)程序中提供了其他詳細(xì)信息。


氧氣測量


使用 Unisense STOX 測量生物膜中的氧濃度 傳感器微電極,每 10 毫米測量一次,從 從上到下。 補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)程序中提供了其他詳細(xì)信息。


基因表達(dá)微陣列


Cy3 或 Cy5 標(biāo)記的 cDNA 與定制的安捷倫微陣列雜交, 在 GenePix Pro 中進(jìn)行分析,并使用 LOWESS 進(jìn)行歸一化。 額外細(xì)節(jié) 在補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)程序中提供。


入藏號


報(bào)告的原始基因表達(dá)陣列數(shù)據(jù)的 GEO 登錄號 在本文中是 GSE55026。


補(bǔ)充信息


補(bǔ)充信息包括補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)程序、四個(gè)數(shù)字、四個(gè)表格和三個(gè)數(shù)據(jù)集,可以通過 本文在線 http://dx.doi.org/10.1016/j.cub.2014.08.057。


致謝


我們感謝 Matthew Lohse、Aaron Hernday、Chiraj Dalal、Oliver Homann 和 本研究中使用的菌株或質(zhì)粒的 Jose Christian Perez; 謝娜 Singh Babak 和 Trevor Sorrells 對手稿發(fā)表評論; 和 豪爾赫·門多薩 (Jorge Mendoza) 提供技術(shù)援助。 我們贊賞使用 加州大學(xué)舊金山分校尼康成像中心。 這項(xiàng)研究得到了美國國立衛(wèi)生研究院的資助 R01AI083311(給 ADJ)和加州大學(xué)舊金山分校突破生物醫(yī)學(xué)研究計(jì)劃獎(jiǎng),部分由桑德勒基金會(huì)資助。 EPF 是 由 NIH Fellowship T32AI060537 支持,CJN 由 NIH 支持 授予 K99AI100896,并且霍華德支持 DKN 和 ESC 休斯醫(yī)學(xué)研究所 (HHMI) 和國家心臟、肺和血液 NIH 研究所 (R01HL117328)。 DKN 是 HHMI 調(diào)查員。


收稿日期:2014 年 3 月 9 日


修訂日期:2014 年 7 月 31 日


接受:2014 年 8 月 22 日


發(fā)布時(shí)間:2014 年 10 月 9 日


參考


1. Savage, D.C. (1977). Microbial ecology of the gastrointestinal tract. Annu. Rev. Microbiol. 31, 107–133.


2. Eckburg, P.B., Bik, E.M., Bernstein, C.N., Purdom, E., Dethlefsen, L., Sargent, M., Gill, S.R., Nelson, K.E., and Relman, D.A. (2005). Diversity of the human intestinal microbial flora. Science 308, 1635–1638.


3. Lo′ pez, D., Vlamakis, H., and Kolter, R. (2010). Biofilms. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2, a000398.


4. Kolter, R., and Greenberg, E.P. (2006). Microbial sciences: the superfi- cial life of microbes. Nature 441, 300–302.


5. Donlan, R.M., and Costerton, J.W. (2002). Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clin. Microbiol. Rev. 15, 167–193.


6. Wolcott, R., Costerton, J.W., Raoult, D., and Cutler, S.J. (2013). The polymicrobial nature of biofilm infection. Clin. Microbiol. Infect. 19, 107–112.


7. Iliev, I.D., Funari, V.A., Taylor, K.D., Nguyen, Q., Reyes, C.N., Strom, S.P., Brown, J., Becker, C.A., Fleshner, P.R., Dubinsky, M., et al. (2012). Interactions between commensal fungi and the C-type lectin receptor Dectin-1 influence colitis. Science 336, 1314–1317.


8. Moyes, D.L., and Naglik, J.R. (2012). The mycobiome: influencing IBD severity. Cell Host Microbe 11, 551–552.


9. Ghannoum, M.A., Jurevic, R.J., Mukherjee, P.K., Cui, F., Sikaroodi, M., Naqvi, A., and Gillevet, P.M. (2010). Characterization of the oral fungal microbiome (mycobiome) in healthy individuals. PLoS Pathog. 6, e1000713.


10. Khatib, R., Riederer, K.M., Ramanathan, J., and Baran, J., Jr. (2001). Faecal fungal flora in healthy volunteers and inpatients. Mycoses 44, 151–156.


11. Nobile, C.J., and Mitchell, A.P. (2005). Regulation of cell-surface genes and biofilm formation by the C. albicans transcription factor Bcr1p. Curr. Biol. 15, 1150–1155.

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